癢安洗劑的薄層層析實驗
來源：醫學教育網發布時間：2012-07-19
摘要：目的建立癢安洗劑的薄層層析定性鑒別方法。方法采用薄層層析法對洗劑中蛇床子、苦參、花椒3味中藥進行定性鑒別。結果供試品的色譜中，在與對照品、對照藥材相應的位置上，均顯相同顏色的斑點，空白無干擾。結論該方法斑點清晰，重現性好，可作為該制劑的定性控制方法。
關鍵詞：癢安洗劑；薄層色譜法；苦參；蛇床子；花椒
癢安洗劑是我院皮膚科的經驗方，由苦參、蛇床子、花椒等多味中草藥提取而成，具有清熱燥濕、祛風止癢、殺蟲之功效，臨床主要用于治療皮膚瘙癢癥，特別是由神經性皮炎醫學教|育網搜集整理、疥瘡等疾病所引起的皮膚瘙癢癥療效明顯。本文對方中苦參、蛇床子、花椒3味中藥用薄層層析法進行鑒別，以建立制劑的定性鑒別方法，控制藥品質量，確保臨床用藥的安全有效。現報道如下。
1材料
癢安洗劑，由本院制劑中心提供；苦參堿、蛇床子素，均由中國藥品生物制品檢定所提供；硅膠G，青島海洋化工廠提供；所用試劑均為分析純；紫外分析儀，上海顧村電光儀器廠。
2方法
2.1蛇床子的薄層色譜鑒別
2.1.1蛇床子素對照品溶液的制備：取蛇床子素對照品適量，加甲醇制成每毫升含1mg的溶液，作為蛇床子素對照品溶液。
2.1.2蛇床子對照藥材溶液的制備：取蛇床子對照藥材1g，加乙醇10ml，超聲處理5min，濾過，濾液作為蛇床子對照藥材溶液。
2.1.3供試品溶液的制備：取癢安洗劑5ml，濃縮成稠膏狀，加5ml乙醇，振搖后放置過夜，濾過，濾液作為供試品溶液。
2.1.4蛇床子陰性對照液的制備：按處方比例取缺蛇床子的其它藥材適量，按癢安洗劑制備工藝制成蛇床子陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制得蛇床子陰性對照溶液。
2.1.5薄層層析：精密吸取以上4種溶液各5μl，分別點于同一塊0.5%羧甲基纖維素鈉的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯（30：1）為展開劑，展開約10cm，取出，晾干，在紫外燈（365nm）下檢視，在供試品色譜中，與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的熒光斑點，而陰性無干擾。
2.2苦參的薄層色譜鑒別
2.2.1苦參堿對照品溶液的制備：取苦參堿對照品適量，加乙醇制成每毫升含1mg的溶液，作為苦參堿對照品溶液。
2.2.2苦參對照藥材液的制備：取苦參藥材2g，加氯仿30ml，濃氨試液0.5ml，靜置過夜，濾過，濾液于水浴上蒸干，殘渣加乙醇2ml溶解，作為苦參對照藥材溶液。
2.2.3供試品溶液的制備：取癢安洗劑5ml，用氨試液調節pH9～10，置分液漏斗中，氯仿萃取4次，5ml/次。合并氯仿液，置60℃水浴上揮干，殘渣用無水乙醇溶解并定容至5ml，搖勻，離心，取上清液作為供試品溶液。
2.2.4苦參陰性對照液的制備：按處方比例取缺苦參的其它藥材適量，按癢安洗劑制備工藝制成苦參陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制得苦參陰性對照溶液。
2.2.5薄層層析：精密吸取以上4種溶液各5μl，分別點于同一塊0.5%羧甲基纖維素鈉的硅膠G薄層板上，以苯丙酮甲醇（8：3：0.5）為展開劑，氨蒸氣飽和，展開約10cm，取出，晾干，醫學教|育網搜集整理再以甲苯醋酸乙酯甲醇水（2：4：2：1）10℃以下放置的上層溶液為展開劑，展開，展距同上，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀溶液無水乙醇（2：1）試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙色斑點，而陰性無干擾。
2.3花椒的薄層色譜鑒別
2.3.1花椒對照藥材液的制備：取花椒對照藥材2g，加乙醚20ml，充分搖勻，浸漬過夜，濾過，濾液揮至約1ml，作為花椒對照藥材溶液。
2.3.2供試品溶液的制備：取癢安洗劑10ml，用乙醚萃取2次，10ml/次。合并醚層，水浴揮醚至3ml，作為供試品溶液。
2.3.3花椒陰性對照液的制備：按處方比例取缺花椒的其它藥材適量，按癢安洗劑制備工藝制成花椒陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制得花椒陰性對照溶液。
2.3.4薄層層析：精密吸取以上3種溶液各5μl，分別點于同一0.5%羧甲基纖維素鈉的硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）醋酸乙酯（19：1）為展開劑，展開，展距約10cm，取出，晾干，噴以二硝基苯肼試液顯色。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性無干擾。
3討論
花椒的薄層色譜鑒別實驗中，曾選用《中國藥典》2000年版Ⅰ部花椒項下的薄層色譜鑒別條件，以正已烷醋酸乙酯（4：1）為展開劑，對花椒進行定性鑒別，結果表明斑點嚴重拖尾，分離效果差，且陰性實驗有干擾。經3次重復實驗，結果亦然。癢安洗劑中苦參堿、百部、花椒均含有生物堿，成分復雜，給分離鑒別帶來了困難，特別是以薄層層析法進行定性實驗時，各組分間相互影響，使斑點拖尾，分離不完全，因此提取方法和展開劑選擇是本實驗定性鑒別的關鍵。在苦參的薄層色譜鑒別實驗中，曾分別以氯仿甲醇濃氨試液（5：0.6：0.2）、苯丙酮甲醇（8：3：0.5）、醋酸乙酯丙酮苯濃氨試液（4：3：2：0.2）為展開劑一次展開、或以苯丙酮甲醇（8：3：0.5）和甲苯醋酸乙酯甲醇水（2：4：2：1）兩次展開，結果發現前3種展開劑展開效果不好，第4種展開系統雖要經兩次展開，操作較復雜，但分離效果好，重現性好，且陰性無干擾，可作為本制劑苦參的定性鑒別方法。
生物堿鑒別實驗中顯色劑的選用：實驗中曾分別以碘化鉍鉀無水乙醇溶液（2：1）和聯用碘化鉍鉀試液、亞硝酸鈉乙醇試液作為顯色劑，前者顯色時間短，放置后很快開始褪色，醫學教|育網搜集整理后者是藥典方法，當先后噴以碘化鉍鉀試液、亞硝酸鈉試液顯色后，板面的顏色變得很深，掩蓋了所有斑點，顯色效果差。但當再噴以碘化鉍鉀無水乙醇試液時，斑點重現，而且經過3次顯色后的斑點不容易褪色。
