健兒止瀉顆粒質量標準的研究
來源：醫學教育網發布時間：2012-07-19
摘要：目的建立健兒止瀉顆粒的質量標準。方法采用比色法測定游離總氨基酸的含量。結果絲氨酸在0.32～0.60μg與吸收度呈良好的線性關系，平均回收率為99.8%，RSD為2.06%（n=6）。結論建立的方法簡便、準確、可靠，可作為控制該藥品的質量標準。
關鍵詞：健兒止瀉顆粒；游離總氨基酸；質量標準；比色法
健兒止瀉顆粒是由芋頭提取精制而成，具有固脾止瀉、調整腸功能紊亂、促進小腸吸收的功能，并具有營養作用。用于嬰幼兒遷延性慢性腹瀉，小兒傷于乳食、寒暖失調、腸炎后久瀉不愈，醫|學教育網搜集整理腸道正常菌群失調及營養不良的患兒。根據文獻記載和一些資料報道，芋頭除含蛋白質，淀粉外，還含有游離氨基酸89.8mg/100g，水溶性多糖12.0%等成分。為了有效地控制健兒止瀉顆粒的質量，本實驗采用比色法對所含游離氨基酸進行了定量研究。
1材料
上海分析儀器廠752分光光度計、玻璃比色皿。試劑與試液均為分析純，水為雙蒸水。
2方法
2.1溶液的制備絲氨酸對照品（含量測定用），由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為624-200104.
2.1.12%茚三酮溶液精密稱取茚三酮2.00g溶于60ml熱水中，冷至室溫后，加水定容至100ml，濾過，取續濾液即得。
2.1.2pH8.24的磷酸鹽緩沖液精密稱取磷酸二氫鉀0.4543g，加水溶解并定容至50ml，備用，精密稱取磷酸氫二納2.3880g，加水溶解并定容至100ml，備用，精密量取磷酸二氫鉀溶液5.0ml，加入100ml量瓶中，加磷酸氫二納溶液至刻度，搖勻，即得。
2.1.3供試品溶液的制備取供試品6g，研細，精密稱定0.35g，置25ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
2.2含量測定
2.2.1顯色反應條件的選擇：pH值的選擇：首先按《中國藥典》2000版二部附錄項下分別配制pH值分別為3.6，4.5，6.0的醋酸鹽緩沖液和pH值分別為6.5，7.0，8.24的磷酸鹽緩沖液。然后精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，分別精密加入上述六種緩沖液1.0ml，再加入2%的茚三酮溶液2.0ml和水7.0ml，搖勻，置沸水浴中加熱30min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，濾過，取續濾液，以相應的溶劑為空白對照，在568nm處測得吸光度。結果顯色反應的pH值為8.24測得的吸收度最高。2%茚三酮溶液用量的選擇：精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入2%的茚三酮溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml，和pH值為8.24的磷酸鹽緩沖液1.0ml，分別補水至15.0ml，搖勻，置沸水浴中加熱30min，取出，在冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，濾過，取續濾液，以相應的溶劑為空白對照，在568nm處測定吸光度，結果2%茚三酮溶液的用量為2.0ml時測得的吸收度最高。顯色反應加熱溫度的選擇：精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入緩沖液1.0ml和2%的茚三酮溶液2.0ml以及水7.0ml，搖勻，分別置60℃水浴和沸水浴中加熱20min，取出，在冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，醫|學教育網搜集整理濾過，取續濾液以相應的溶劑為空白對照，在568nm處測定吸光度，結果溫度為100℃的沸水浴測得的吸收值高。顯色反應加熱時間的選擇：精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入2%的茚三酮溶液2.0ml和磷酸鹽緩沖液1.0ml，水7.0ml，搖勻，分別置沸水浴中加熱5，10，15，20，25，30，35，40min取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，濾過，取續濾液，以相應加熱時間的溶劑空白為對照，在568nm處測定吸光度，結果加熱時間為30min測得的吸收值最高。供試品的含量測定方法：精密量取供試品溶液5.0ml置25ml量瓶中，精密加入pH8.24的磷酸鹽緩沖液1.0ml和2%的茚三酮溶液2.0ml補水至15.0ml，搖勻，置沸水浴中加熱30min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，加水定容至刻度，濾過，取續濾液，以相應的溶劑為空白對照，在568nm處測定吸光度。
2.2.2標準曲線的制備：精密稱取絲氨酸對照品9.97mg，加水溶解并定容至100ml，作為貯備液。精密吸取絲氨酸對照品貯備液50ml，加水稀釋至100ml，作為對照品標準溶液。分別精密吸取對照品標準溶液7.0，8.0，9.0，10.0，11.0，12.0ml，按照供試品含量測定方法項下操作，在568nm處測定吸光度。以絲氨酸對照品濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程，A＝51.3541C－0.5208，r＝0.9999.
2.3精密度：實驗精密吸取批號為040301的同一份供試品溶液5.0ml，按照供試品含量測定方法項下操作，平行測定5份，RSD為0.81%，表明本方法精密度良好。
2.4穩定性：實驗精密吸取批號為040301的供試品溶液5.0ml，按照供試品含量測定方法項下操作，測定吸光度，然后間隔30min重復測定1次，結果表明顯色后的溶液在120min以內吸光度值穩定。
2.5重復性：實驗取批號為040301的供試品，按照供試品含量測定方法項下操作，平行測定5份，結果供試品平均含量為：6.272mg/g，RSD為：1.99%，表明本方法重復性良好。
2.6加樣回收：實驗精密稱定批號為040301的供試品粉末0.35g，平均含量為：6.272mg/g，分別加入濃度為0.828mg/ml的絲氨酸對照品溶液2.1，2.1，2.6，2.6，3.1，3.1ml，按照供試品含量測定方法項下操作，測定吸光度，平均回收率為：99.80%，RSD為：2.06%，表明本方法準確性良好。
2.7含量限度的確定：取10批供試品分別測定含量，平均含量為43.052mg/袋（每袋2g）。考慮到芋頭產地不同等多種因素的影響，含量限度暫定為：每袋含總游離氨基酸以絲氨酸計不得少于20mg.
3結果與討論
本實驗中絲氨酸對照品與最大吸收波長的確定：芋頭含的游離氨基酸中以絲氨酸含量最高。精密吸取絲氨酸對照品貯備液和供試品溶液各5.0ml，按照供試品含量測定方法項下操作，在分光光度計上掃描，得吸收光譜。結果表明供試品最大吸收波長568nm，與絲氨酸對照品完全一致，可以直接用比色法測定供試品中總游離氨基酸的含量。
